抗HBVcAg單克隆包被抗體吸附在微量滴定板上。樣品或標準品中存在的HBV核心抗原與吸附在板上的抗體結合；添加FITC 綴合的小鼠抗 HBVcAg抗體并與第一抗體捕獲的抗原結合。

在孵育和洗滌步驟之后，加入HRP 偶聯(lián)的小鼠抗 FITC抗體并與FITC偶聯(lián)的抗 HBVcAg 結合。在洗滌步驟中去除未結合的 HRP 偶聯(lián)的小鼠抗 FITC抗體后，將與HRP反應的底物溶液添加到孔中。

與樣品中存在的HBV核心抗原的量成比例地形成有色產(chǎn)物。通過添加酸終止反應并在 450 nm 處測量吸光度。從重組HBV核心抗原制備標準曲線，然后確定樣品濃度。